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“乱花渐欲迷人眼” ——简评各种血小板功能检测方法

2022-08-22 作者:美高怡生 浏览数:

由于心脑血管疾病患者使用抗血小板药物有时效果不理想,导致预后不佳,继而发现治疗后血小板剩余活性与预后相关,似乎通过监测血小板活性来调整用药有助于改善预后(然而至今仍有争议),因此越来越多的血小板功能检测技术被开发利用,因课题所需本人曾试用过多种检测方法,在此做一简评,希望有助于增进实验室人员对血小板功能检测的了解。
血小板聚集试验(光学浊度法,LTA):
    尽管血小板聚集试验费时费力、受影响因素多,但仍是最基本和必备的血小板功能检测方法,若能确保规范地标本处理和检测,结果准确性并不逊于其他方法学。常用五种诱导剂中,二磷酸腺苷(ADP)、花生四烯酸、肾上腺素与胶原分别对应四种血小板活化途径,瑞斯托霉素诱导的血小板聚集一定程度上反映的是血小板的粘附功能。ADP和花生四烯酸诱导剂常用于抗血小板药的监测,其聚集率所反映的血小板剩余活性与抗血小板治疗预后显著相关。
    “标准化”对于血小板聚集试验能够维持生命力至关重要,所以多写一点,以下内容主要摘自CLSI H58-A指南:
    LTA聚集试验对标本的要求与常规凝血检查基本相同,但对标本运送时间及避免脂血、黄疸方面要求更严格。理想时间是采血后2小时内完成检测,最大允许时间是4小时内。
LTA检测对富血小板血浆(PRP)的PLT数量要求最好在100-400×109/L之间,低于100×109/L可致聚集率偏低,超过400×109/L时建议用乏血小板血浆(PPP)调整到200-250×109/L。推荐的PRP离心条件是170g/15min,各种文献应用的离心条件范围是:100-250g/10-15min。推荐的PPP离心条件是1500g/15min,确保PPP中PLT计数<10×109/L。PRP离心完成后,建议放置15min血小板活性稳定后再开始检测。

下表列出了各种诱导剂推荐的使用终浓度:

血栓弹力图(TEG):

    TEG有专用于抗血小板药物监测的血小板图试验,标本处理相比于LTA更简便,受标本限制也更少(PLT计数低、脂血标本等也可检测),但并无证据显示其反映血小板功能水平及指导用药比LTA更准确或有效,在其昂贵的费用与易用性之间如何选择见仁见智。

CYP2C19基因型检测:

    主要检测*2、*3等位基因,常用方法有基因芯片法和测序法,反映对氯吡格雷的代谢情况。慢代谢基因型通常应用氯吡格雷效果不佳,但与预后相关性有争议,中国人群的中、慢代谢型比例很高(超过50%),应用价值也更小。

VASP磷酸化检测:
常用流式细胞术或ELISA法。商品化的VASP流式检测试剂盒非常易用,甚至并不比血小板聚集试验麻烦多少,而且标本采集后48小时内处理均可,有利于集中检测。特异性针对P2Y12受体拮抗药(如氯吡格雷、替格瑞洛)。或许也是药物代谢基因型的差异,应用氯吡格雷的中国人群中VASP检测的血小板反应指数(PRI)较西方人群高,可能有必要提高判断阈值(一般PRI>50%提示抵抗)。从诊断效率上来说,用于普拉格雷、替格瑞洛等新型P2Y12拮抗药或许价值更大。
PFA-200:
    作为一期止血筛查试验,其COL/EP试剂包可用于血小板及VWF的功能缺陷筛查,结合COL/ADP试剂包可评估阿司匹林药效,P2Y试剂包可用于评估P2Y12受体拮抗药。该试验受影响因素较多,HCT、PLT数量等等都可能影响闭孔时间的长短,检测重复性一般,在抗血小板监测方面其特异性和易用性不及同为POCT的Verifynow,成本上或许有优势。
Verifynow:
目前西方抗血小板监测相关临床试验主要应用方法,最简便、特异性高,贵。 
    总的来说,监测P2Y12受体拮抗药方面,与ADP诱导的血小板聚集试验及TEG相比,VASP、PFA及Verifynow提高特异性的方法基本都是通过加入前列腺素PGE-1来实现,PGE-1可抑制P2Y1、IP等受体途径,使P2Y12受体拮抗药的作用更突出。然而血小板活化途径繁多,抗血小板药物间也存在协同效应,特异性高的方法往往不易反映血小板的整体活性,因此也与抗血小板治疗患者预后的相关度不高,根据其结果来调整治疗方案的效果就更难说。目前的多数大样本临床试验都表明,这些特异性的实验室监测方法所反映出的抗血小板药物抵抗性,似乎不是可修正的危险因素。所以,各种新技术应用价值尚无定论之前,对于临床实验室来说,踏踏实实做好血小板聚集试验可能意义更大。